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第4章_细菌药敏试验及其耐药表型检测课件.ppt

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细菌 试验 及其 耐药 表型 检测 课件
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处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 第 4章 细菌药物敏感 试验及其耐药表型检测 王辉 北京大学医学部 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 抗菌药物敏感试验 测定抗菌药物在体外对病原微生物有无 抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏 感性试验( Antimicrobial Susceptibility Test),简称药敏试验( AST)。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 药敏试验的意义 预测抗菌治疗的效果; 指导抗菌药物的临床应用; 发现或提示细菌耐药机制的存在,能帮助临 床医生选择合适的药物,避免产生或加重细 菌的耐药; 监测细菌耐药性,分析耐药菌的变迁,掌握 耐药菌感染的流行病学,以控制和预防耐药 菌感染的发生和流行。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 药敏试验 MIC:在与微生物生长速率有关的特定 时间间隔内,通常是 18 24小时,能够 抑制被测菌生长的最低药物浓度。 对倍稀释的优点 : 操作容易 敏感株的 MIC呈正态分布 区分异常 (R)与敏感 (S)的菌群 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 药敏试验折点的建立 1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 定抑菌圈折点 统计学的 线性回归 计算 错误率 :尽可能减少极重要误差 (假敏感率 ) 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 MIC的分布 0 5 10 15 20 0.008 0.032 0.125 0.5 2 8 32 128 512 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 药代动力学和药效学 药代动力学 :药物吸收,分布,代谢,排泄 药效学 :药物对机体的作用 时间依赖型( TMIC : -内酰胺类,大环内酯类 浓度依赖型( AUC/MIC比率: AGS, FQ 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 MIC与抑菌圈直径的线性关系 耐药 中介 敏感 R I S Log2. MIC D 1 d2 抑菌圈直径( mm) v 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 抑菌圈直径与 MIC的关系 MIC (ug/ml) 1 2 3 5 2 2 2 2 2 1 1 1 1 2 2 5 8 1 1 1 2 5 1 2 5 6 8 小误差 中介 32 34 耐药 重要误差 小误差 9 敏感 小误差 极重要误差小误差 24 26 28 3014 18 20 22 0.25 0.5 10 12 1 2 4 8 256 256 16 32 64 128 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 不同国家的 判定折点 可能不同 原因: 用药剂量不同,服药的间隔不同 评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株(即特定的耐药群) 技术因素:接种、培养基 在我国主要遵循 临床实验室标准化委员会( Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)制定的抗菌药 物选择原则。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 敏感性分类 (CLSI的 定义 ) 敏感( Susceptible) 用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的 MIC 5倍以上。 耐药( Resistance) 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 敏感性分类( 2) 中介 (Intermediate) MIC接近 血、体液中药物的浓度,治疗 反应率低于敏感株 药物生理浓集部位有效 (尿 -FQ) 加大用药剂量可能有效 缓冲区:防止操作的系统误差造成重 大结果的判定错误 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 药敏试验的方法学 半定量 纸片扩散法 (抑菌圈直径 ) MIC法: 稀释法 (肉汤、琼脂 ) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼 脂平板上,纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度, 并与该药对测试菌的 MIC呈负相关关系。 纸片扩散法( Kirby-Bauer法) 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 纸片扩散法 1. 水解酪蛋白( MH)培养基, pH7.2 7.4,做成琼脂厚度 4mm,直径 90mm的平板; 2. 挑取孵育 16 24小时已分纯菌落,置于生理盐水管中, 振荡混匀后校正浓度至 0.5麦氏标准。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 纸片扩散法 3. 用无菌棉拭子蘸取菌液,在试管内壁旋转挤去多余菌液 ; 4. 然 后在 MH琼脂表面均匀涂布接种 3次,每次旋转平板 60度 ; 5. 最后沿平板内缘涂抹 1周 ; 6. 平板在室温下干燥 3 5min,用无菌镊子或商品化的纸片分配 器将含药纸片紧贴于琼脂表面,各纸片中心距离应大于 24mm, 纸片距平板内缘大于 15mm。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 纸片扩散法 7. 35 孵育 16 24小时量取 抑菌圈直径; 8. 根据抑菌环的直径,按照 CLSI标准判读,报告敏感、 中介、耐药。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 18 纸片扩散法影响因素 MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度,预孵育时间 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 19 纸片扩散法标准化 CLSI:美国实验室标准化委员会 (Clinical and Laboratory Standards Institute) 每年修订更改 包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 20 CLSI的法规 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控; 规定常规测试报告的抗生素; 不同的药判定标准不同; 不同的菌判定标准也不同。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 21 常规测试并报告的药物分组 (1) 肠杆菌科 绿脓和非肠杆菌科 一 级 氨苄西林 头孢他啶,庆大霉素 头孢唑林,庆大霉素 替卡西林,哌拉西林 二级 阿米卡星 阿米卡星 氨苄西林 /舒巴坦 头孢吡肟,头孢哌酮 阿莫西林 /克拉维酸 氨曲南 头孢呋肟,头霉素 环丙沙星,亚胺培南 头孢噻肟,头孢曲松 替卡西林 /克拉维酸 环丙沙星,亚胺培南 妥布霉素,复方磺胺 替卡西林,哌拉西林 三级 氨曲南,头孢他啶 头孢曲松 卡那霉素,奈替米星 氯霉素,奈替米星 妥布霉素 四环素,氯霉素 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 22 常规测试并报告的药物分组 (2) 葡萄球菌 肠球菌 一级 苯唑西林,青霉素 青霉素,氨苄西林 二级 红霉素类 万古霉素 克林霉素,万古霉素 三级 氯霉素 庆大霉素 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 23 常规测试并报告的药物分组 (3) 流感嗜血杆菌 肺炎链球菌 一级 氨苄西林,青霉素 青霉素,红霉素 复方磺胺 复方磺胺 二级 头孢呋肟,头孢噻肟 氧氟沙星,四环素 头孢他啶,氯霉素 万古霉素 三级 阿奇霉素,头孢克罗 氯霉素,利福平 环丙沙星,亚胺培南 利福平,四环素 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 24 预报用药 (一 ) 测试药 菌名 推测其他药物的敏感性 苯唑西林 葡萄球菌 所有 -内酰胺类 四环素 所有(除葡 多西环素,米诺环素 萄球菌和不 动杆菌 红霉素 G 球菌 罗红 霉素 ,克拉 霉素 , 阿奇霉素 克林霉素 所有 林可霉素 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 25 预报用药 (二 ) 测试药 菌名 推测其他药物的敏感性 氨苄西林 肠球菌 青霉素 青霉素 G 葡萄球菌 氨苄 西林 ,美洛 西林 替卡 西林 头孢噻吩 肠杆菌科 头孢 拉定,头孢氨苄 头孢 克罗 奈啶酸 肠杆菌科 所有 氟喹诺酮类 万古霉素 所有 替考拉宁 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进 行一系列不同倍数稀释(通常为双倍稀释),经培 养后观察其最低抑菌浓度。 稀释法中用琼脂培养基者为琼脂稀释法,用肉汤培 养基者为肉汤稀释法。 药敏试验 -稀释法 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 常用抗菌药物容积稀释法 步骤 浓度 ( mg/mL) 来源 体积(mL) CAMHB(mL) 最终浓度( mg/mL) 1 5120 储存液 1 9 512 2 512 步骤 1 1 1 256 3 512 步骤 1 1 3 128 4 512 步骤 1 1 7 64 5 64 步骤 4 1 1 32 6 64 步骤 4 1 3 16 7 64 步骤 4 1 7 8 8 8 步骤 7 1 1 4 9 8 步骤 7 1 3 2 10 8 步骤 7 1 7 1 11 1 步骤 10 1 1 0.5 12 1 步骤 10 1 3 0.25 13 1 步骤 10 1 7 0.125 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 抗菌药物的稀释和融解 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 29 肉汤稀释法 4 8 16 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清 抗生素倍比稀释,种菌 105CFU/ml , 孵育 35 , 16 20h,判读。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 30 肉汤稀释法 调节离子浓度的 MH肉汤 宏量肉汤法( 2ml, 13x100mm ) 微量肉汤法 ( 0.1ml, 微量板 ) 自动化仪 优点:准确,可靠,可用于研究 。 缺点: 劳动强度大 细菌生长情况不可查 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 31 琼脂稀释法 浓度 16 32 64 128 256 ug/ml 制备含对倍抗生素浓度梯度的平板,制备菌悬液, 点种菌, 104/每个点,孵育,判读结果 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 32 琼脂稀释法 优点:金标准 精确可靠 可同时测定多株菌( 40株) 细菌生长情况可查 缺点: 测多个药时劳动强度大 制备平皿费时费力 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 E test 法 E试条是一条 5mm 50mm的无孔试剂载体,一面固 定有一系列预先制备的,浓度呈连续指数增长稀释抗 菌药物,另一面有读数和判别的刻度; 抗菌药物的梯度可覆盖有 20个 MIC对倍稀释浓度的 宽度范围; 将 E试条放在细菌接种过的琼脂平板上,经孵育过夜, 围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈,圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 2020/10/17 wanghui-ART 34 E test 法 细菌生长 区 E test 塑料 条 椭圆形 细菌生长 抑制区 256 128 8 016 判读抑菌浓度 ( MIC ug/ml) 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 E test 法 菌液制备及接种均同纸 片扩散法。 90mm平板上可放 E试验 试条 1 2条, 140mm 平板最多可放 6条。 孵育温度及时间同纸片 扩散法。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 36 E test 法 优点 连续浓度梯度,与琼脂稀释法相关性好 影响因素少,稳定性高 操作简单,省时 缺点:昂贵 用途:快生长菌,苛养菌,厌氧菌,酵母菌, 分枝杆菌 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 37 评价药物体外抗菌活性的指标 MIC50, MIC90, MIC 均值, MIC 范围, R, I, S MIC50/ MIC90: MIC从小到 大 排列,位于第 50 / 90 百分位菌株的 MIC值 单纯比较 MIC50, MIC90是片面的,还要同时看平均 MIC及 MIC范围 同时结合 R, I, S, (不同药物血浓度不同,安全范 围不同 ) 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 细菌耐药机制 细菌耐药机制主要有四种: 产生一种或多种水解酶、钝化酶和 修饰酶; 抗生素作用的靶位改变,包括青霉 素结合蛋白位点、 DNA解旋酶、 DNA拓扑异构酶 的改变等; 细菌膜的通透性下降,包括细菌生 物被膜的形成和通道蛋白丢失; 细菌主动外排系统的过度表达。 在上述耐药机制中,第一、二种耐药 机制具有专一性,第三、四种耐药机 制不具有专一性。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 -内酰胺酶 内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗 生素的灭活酶;该酶位于革兰阳性球菌菌体外, 革兰阴性杆菌间质中; 检测方法有微生物培养法、碘淀粉法、头 孢硝噻吩纸片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为 简单、方便、快速,应用于临床检测。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 葡萄球菌属 青霉素 方法 敏感 中介 耐药 MIC 0.12 mg/ml - 0.25 mg/ml 纸片扩散法 29 mm - 28 mm CLSI M100-S20. Table 2C. 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 诱导 -内酰胺酶的检测 如果青霉素的药敏结果出现以下情况,需 要做 诱导 -内酰胺酶 的检测 : MIC 0.12 g/ml Zone diameter 29 mm 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 诱导 -内酰胺酶试验 苯唑西林 (诱导剂 ) -接种纯菌落于琼脂上 (例如, BAP, MHA) ; -贴 -内酰胺类纸片 (例如 ,苯唑西林 , 头孢西丁 ); -孵育过夜; -测试抑菌圈周围的细菌; -如果 -内酰胺酶阳性 ,报告青霉素 R。 Pos Neg 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 超广谱 -内酰胺酶( ESBLs) ESBLs是指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌 素类和单环 内酰胺类氨曲南的一类酶; ESBLs不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物,能被 克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等 内酰胺酶抑制剂 所抑制; ESBLs主要见于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,此外 也见于肠杆菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、沙 雷菌属等其他肠杆菌科细菌、不动杆菌、铜绿假单 胞菌。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 超广谱 -内酰胺酶( ESBLs) 纸片法,出现以下一种情况即可怀 疑该菌株产生 ESBL (筛选阳性): 头孢泊肟 17mm 头孢他啶 22mm 头孢噻肟 27mm 头孢曲松 25mm 氨曲南 27mm 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 超广谱 -内酰胺酶( ESBLs) 纸片法(表型确认试验) 头孢他啶和头孢他啶 /克 拉维酸、头孢噻肟和头孢 噻肟 /克拉维酸。 任一复方制剂的抑菌圈直 径与相应单药抑菌圈直径 相差 5mm时,即可判断 该菌产 ESBL。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 超广谱 -内酰胺酶( ESBLs) 稀释法,出现以下一种情况即可怀疑该菌 株产生 ESBL: 头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲 南 MIC2mg /mL 或头孢泊肟 MIC8mg /mL 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 超广谱 -内酰胺酶( ESBLs) 稀释法(表型确认试验) 头孢他啶和头孢他啶 /克拉维酸、头孢噻肟 和头孢噻肟 /克拉维酸。 任何一组酶抑制剂复方制剂的 MIC值比相 应单药的 MIC降低 3个稀释度者即可判定该 菌为产 ESBL菌株。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 AmpC酶的特征 AmpC酶是在革兰阴性菌中发现的由染色体 或质粒介导的水解头孢菌素的 型 内酰胺酶, 可分为诱导酶和非诱导酶。 与 ESBLs不同的是, AmpC酶对三代头孢菌 素耐药但对四代头孢菌素敏感且不被酶抑制 剂克拉维酸所抑制,但其酶活性可被氯唑西 林和硼酸抑制。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 AmpC酶的检测方法 头孢西丁三维试验是检测 AmpC酶的经典方法; 除此之外,还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺 炎克雷伯菌和大肠埃希菌的 AmpC酶、 AmpC Disk、头孢西丁琼脂基础法等。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 碳青霉烯酶 碳青霉烯酶可以定义为具有水解碳青霉烯类抗生素 活性的 -内酰胺酶,主要分布于 -内酰胺酶 A、 B、 D类中。 根据水解机制中作用位点的不同可以将碳青霉烯酶 分为两大类: 一类称为金属碳青霉烯酶,这类酶以金属锌离子为活性 作用位点,可以被 EDTA抑制,属于 B类 -内酰胺酶; 另一类以丝氨酸( Ser)为酶的活性作用位点,可以被酶 抑制剂克拉维酸和他唑巴坦所抑制,属于 A、 D类 -内酰 胺酶。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 碳青霉烯酶 A类酶 B类酶 D类酶 染色体编 码: SME NMC IMI 质粒编码 : KPC GES 质粒编码 OXA-23 OXA-24 OXA-51 OXA-58 OXA-55 OXA-48 OXA-50 OXA-60 OXA-62 金属酶,位于 GMEs上,包括 VIM, IMP, GIM, SPM, SIM等 可以被酶抑制剂抑制 可以被 EDTA抑制 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 碳青霉烯酶表型检测方法 -改良 hodge试验 ATCC25922, 0.5麦氏, 1:10稀释涂 MH平板 平皿中心贴 10g 厄他培南或亚胺培南纸片 10l环挑取 3 5个菌落从平板中心纸片边缘向平板边缘划线 被测菌株与大肠埃希菌 ATCC25922 抑菌环交汇处大肠埃希菌生 长增强,即产碳青霉烯酶。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 改良 hodge试验的结果判读 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 金属酶表型检测方法: EDTA协同试验 用 0.5麦氏单位的待测菌悬液涂布 M H 平板。 贴 IMP (10g)纸片距其 1cm 处贴 EDTA纸片( 0.5mol/L 4l)。 35 过夜培养。 亚胺培南抑菌圈在靠近加 EDTA纸片侧明显扩大者为产金属酶菌 株。 亚胺培南 EDTA 10mm 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA)携带 SCCmec基因盒。 SCCmec基因盒中的 MecA基因编码修饰的青霉素结合蛋白 PBP2a,这种蛋白对甲氧西林和其他的 -内酰胺类抗生素亲和 力下降,从而导致对这些抗生素的耐药。 SCCmec主要由 mec复合物和 ccr复合物两部分组成。根据不 同 mec复合物和 ccr复合物的组合,可以将 SCCmec分成不同的 型别,目前已发现 8种 SCCmec型。 耐甲氧西林葡萄球菌 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 SCCmec基因盒 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 耐甲氧西林葡萄球菌的检测 MRSA的检测方法有头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林 琼脂稀释法、乳胶凝胶试验检测 PBP2a、 mecA基因 测定及 MRSA显色培养基。 头孢西丁纸片法、苯唑西林琼脂稀释法是目前检测耐 甲氧西林葡萄球菌最常用筛选方法。 对于金黄色葡萄球菌, MRSA的检测可以使用苯唑西 林纸片,但对于凝固酶阴性葡萄球菌则不能使用苯唑 西林纸片。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 甲氧西林耐药的葡萄球菌( MRS) MRS检测 药物 纸片法 稀释法 金黄色葡萄球菌 1mg 苯唑西林 路邓葡萄球菌 1mg 苯唑西林 金黄色葡萄球菌和路 邓葡萄球菌 30mg 头孢西丁 除路邓以外的凝固酶 阴性葡萄球菌 1mg 苯唑西林 30mg 头孢西丁 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 凝固酶阴性葡萄球菌中苯唑西林 MIC结果的报告策略 * 苯唑西林 MIC (g/ml) 进行 mecA 或 PBP2a 或 头孢西丁纸片扩散 0.25 4.0 0.5-2.0 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 阴性 阳性 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 *检测无菌部位感染的 非表皮葡萄球菌菌株 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 克林霉素诱导耐药试验 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 克林霉素诱导耐药葡萄球菌 红霉素 *耐药的金葡菌或凝固酶阴性葡萄 球菌可对克林霉素 结构性或诱导性 耐药或 仅对红霉素耐药。 *或其他大环内酯类 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 机制 耐药基因 红霉素 克林霉素 核糖体修饰 -药物不能结 合于靶位 erm R S* R R 结构性 泵 -药物被泵出 msrA R S erm = erythromycin ribosome methylase msrA = macrolide streptogramin resistance *需要诱导来显示耐药性 红霉素 /克林霉素耐药葡萄球菌耐药机制 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 诱导性克林霉素耐药( erm介导) 葡萄球菌 -“D试验” 患者不会对克林霉素有反应 -报 告克林霉素耐药 无克林霉素诱导( msrA介导) 真的克林霉素敏感 -报告克林霉素敏感 “ D” 阳性 阴性 15 26 mm 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 葡萄球菌诱导性克林霉素耐药的 MIC检测方法 4.0 g/ml 红霉素 0.5 g/ml 克林霉素 No growth = 无诱导性克林霉素 耐药 生长 =诱导性克林霉素耐药 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 对于红霉素耐药,克林霉素敏感的葡萄球菌, 需检测诱导性克林霉素耐药 注意 试验 适用于金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌 (苯唑西林敏感和 耐药株 ); 对于 CoNS, 该试验不必常规开展因为克林霉素很少用于 治疗凝固酶阴性葡萄球菌; 大多数医院相关 MRSA是克林霉素耐药的; 大多数社区相关 MRSA是克林霉素敏感的 (msrA 基因型 ); 克林霉素可以口服给药。 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 万古霉素中介耐药的金黄色葡萄球菌( VISA) 耐药是由于: 增厚的细胞壁 检测 困难;表型不稳定 菌落形态 不典型金葡菌 万古霉素敏感 万古霉素中介 细胞壁 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 MRSA (not VISA) VISA 血琼脂上 48小时生长 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 当有以下一个或多个情况时菌株可疑为 VISA -內酰胺类药物的 MIC降低 达托霉素 MIC升高 菌落形态不典型(一些为微小菌落) 肉汤中生长迟缓(如血培养) 凝固酶反应微弱 /延迟 经过几次次代 培养后: 菌落回复为典型形态 万古霉素 MIC降低并且菌株变为万古霉素敏感 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌( VRSA) 耐药是由于 从万古霉素耐药肠球菌( VRE)中获得 vanA基因 美国报道例数 9个患者 检测 大多数标准方法均可检测 菌落形态 典型金葡菌 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 vanA从 VRE转至金葡菌 vanA 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 纸片扩散法折点 葡萄球菌 -万古霉素 CLSI 文件 Susceptible 敏感 Intermediate 中介 Resistant 耐药 M100-S18 2008 15 - - New!新 M100-S19 2009* - - - CLSI M100-S19. Table 2C. 对于金黄色葡萄球菌 *假如抑菌圈 7 mm, 用 MIC法检测万古霉素 (若有需要) 万古霉素纸片扩散法仅在检测携带 van-A金葡菌( VRSA)时可信;需确证 没有抑菌圈 (6 mm) 纸片扩散法不能鉴别 VSSA和 VISA 纸片扩散法不能检测凝固酶阴性葡萄球菌 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 肠球菌 高水平氨基糖苷类耐药筛查 纸片扩散法 120 g 庆大霉素 ; 300 g 链霉素 10 mm = 无 高水平氨基糖苷类耐药 MIC筛查 庆大霉素 : 500 g/ml 链霉素 : 1000 g/ml (肉汤 ) 2000 g/ml (琼脂 ) 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警民关系。 肠球菌氨基糖苷类修饰酶 链霉素 庆大霉素 妥布霉素 阿米卡星 /丁胺卡那 6-AAD + - - - 3APH - - - + 2”APH/6AAC - + + + 6AAC* - - + + * 在所有屎肠球菌中均发现 + = 酶可以修饰药物;药物无协同性 - = 酶不能修饰药物;药物有协同性 处理同志关系上,搞庸俗关系学,热衷于迎来送往;少数官兵警容不严整,礼节礼貌不周,不分场合胡吹海侃,“出口成脏”;酒后失态,损害警
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本文标题:第4章_细菌药敏试验及其耐药表型检测课件.ppt
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