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酶联免疫吸附试验测AFP――ELISA双抗体夹心法课件.ppt

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免疫 吸附 试验 AFP ELISA 抗体 夹心 课件
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ELISA综合性实验二 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 综合性实验设计方案探讨 ELISA最佳工作浓度的选择 此次试验提供 0.5mg/mL的包被抗体原液每组 300 l (经过一系列的预实验,现在我们抗体包被的浓度范围缩 小为 10 g/mL 60 g/mL)。 包被用 Na2CO3缓冲液每组各 10ml 酶标抗体稀释液、抗原稀释液每组 10ml 1:50酶标抗体液每组 100 l(预实验后工作浓度范围 缩小在 1:2000 1:10000之内) 800 g/mL的检测抗原原液每组 800 l(自己调整检 测浓度,此次试验强阳性抗原为 400 g/mL、弱阳性抗原 浓度为 20 g/mL、阴性直接加抗原稀释液 ) 聚苯乙烯酶标板条 3条,共 36孔 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 实验设计操作要求 包被抗体、酶标抗体、检测抗原浓度的确立; 聚苯乙烯板条每孔加包被抗体液 100L, 4 包被 48h。 弃去孔内液体,每孔加 200L封闭液, 4 封闭 24h。 弃去封闭液,风干,检测(检测时每孔所加的各 稀释度的酶标液和抗原都为 100L ),结果分析。 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 标本检测的原理 将特异性抗体包被固相载体,加入受检标 本(抗原)使之与固相载体上的抗体结合 成抗体抗原复合物,加入酶标抗体形成抗 体抗原酶标抗体复合物,加入底物显色。 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 实验材料与仪器 待检抗原原液、酶标抗体、抗原稀释液、 酶标稀释液、酶标板条、洗涤液、显色液 A、显色液 B、终止液 滴管、吸管、微量加样器、移液管 酶标仪、温育箱 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 操作 在酶标板条的孔中加入相应浓度的抗原( 100UL/孔) 37 30min 弃孔内液体,用洗涤液洗 3遍, 30s/次 拍干 加所设计的不同工作浓度的酶标抗体 100UL/孔 37 30min 弃去孔内液体,同上洗涤三次 拍干 加底物 A、 B液各 2滴 (100UL/孔 ) 37 15min 显色后加终止液 1滴 (50UL/孔 ) 酶标比色仪 450nm读取 OD 值 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 棋盘滴定法选择最佳工作浓度 选择标准:强阳性参考血清 A值为 0.8左右 阴性参考血清 A值 <0.1 (即:选择强阳性对照孔最接近 0.8,且阴 性孔小于 0.1的孔所对应的包被浓度和酶标 浓度为最佳的 ELISA检测浓度。) 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 实验设计要求 在实验本上绘出 36孔设计图表 写出实验中选择的包被液的情况 写出实验中选择的包被抗体、酶标抗体、 检测抗原的浓度,和系列稀释方案。 写出最终测得的 OD值并分析实验结果。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 评价 双抗体夹心 ELISA法简单易行,不需 复杂的仪器设备,特异性强、敏感性 高,其中一步法更简单、省时,但有 Hook效应的缺点。 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 Ab Ag Ab* Ab Ag Ab* Ab Ag Ag Ab* Ab* Ag Ab* a b c d 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 Ab Ag Ab Ag ( b复合物) (1) Ab Ag Ab* Ab Ag Ab* ( a复合物) (2) 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 HooKS 效应(钩状效应) 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 ELISA影响因素实验设计 第一组:边缘效应 第二组:叠加效应 第三组:温浴方式 第四组:加样方式 第五组:洗涤次数 第六组:温浴时间 第七组:试剂温度 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 小组讨论结束后每组写出一份具体的试验设计方 案,下节课上每组派代表上台讲述实验方案和可行性,讲述时间为 2-3分钟左右。 要求设计方案中包括: 实验对象、标本要求 操作条件、操作过程(可画出 96孔加样示 意图或对比示意图等) 结果判断标准 结果分析方式 其临床表现为持续性、进行性的多个智能功能域障碍的临床综合征,包括记忆、语言、视空间能力、应用、辨认、执行功能及计算力等认知功能的损害。 谢谢!
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本文标题:酶联免疫吸附试验测AFP――ELISA双抗体夹心法课件.ppt
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编号: 20200724135254788

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上传时间: 2020-11-22

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