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肺炎支原体讲稿新股份版课件.ppt

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肺炎 支原体 讲稿 股份 课件
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而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 储迅涛 博士 肺炎支原体 明胶颗粒凝集试验 及其临床应用 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 肺炎支原体 ( Mycoplasma pneumoniae, Mp) 是引起 非典型性肺炎的常见病原体 。 支原体肺炎的发病率可 占到所有肺炎病例的 2030% Mp主要的易感对象为儿童和年轻人 , 但近年来发现 65 岁以上老年人群发生的社区获得性肺炎中有 15%是 Mp 引起的 , 且 5岁以下的婴幼儿也可发生感染 Mp感染可发生在一年中的任何季节 , 没有明显的季节 流行特征 。 支原体肺炎同时具有地方性和周期流行性 的特点 , 流行周期一般为 37年 , 在流行的高峰时 , 其 发病率可达到肺炎总发病率的 7080% Mp感染临床上主要表现为气管炎和上呼吸道感染症状 。 约 15%的感染者没有临床症状 , 只有 510%会发展成 为肺炎 。 其主要特点是起病较慢 , 有头疼 、 发热 、 咽 喉疼痛 、 不适以及最典型的干咳等症状 。 一般情况下 , 支原体肺炎的死亡率不高 , 但少见的肺外感染 ( 累及 神经 、 心脏 、 关节 、 红细胞等 ) 却往往表现出更严重 的症状 肺炎支原体概况 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 可引起非典型肺炎的病原体很多 , 单凭临床症状和影象 学检查不能明确区分 Mp和其它病原体所引起的感染 , 因此 实验室检测结果就显得尤为重要: 一般实验检查 白细胞计数 (25%升高 );血沉 (30%升高 );痰液检 查 (无革兰阴性菌 );肝肾功能 (可能出现一些非特异性的异 常 ) 培养 根据临床上的情况 , 咽拭子 、 痰液 、 胸水 、 肺活检 组织等均可用于培养 。 应注意床边接种及使用运送培养基 ( SP4肉汤 ) 。 培养需要营养要求很高的专用选择性培养基 , 耗时长 (35周 )且敏感性一般 血清学试验 是目前实验室检测的主要方法 抗原检测 使用抗原捕获酶免疫测定 , 据称可达到较高的敏感性和 特异性 。 但该方法有被分子生物学方法取代的趋势 分子生物学检测 近年来各种分子杂交和 PCR检测方法在科研中的应用 越来越多 , 今后有可能成为 Mp实验室诊断的常规方法之一 肺炎支原体的实验室检测 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 人类对 Mp无先天免疫性 , 尚无可实际应用的有效疫 苗 , 感染后也不能产生完全的保护性免疫 Mp特异性的 IgM抗体在发病后不久即可出现升高 , 14周内达到峰值 , 然后在几个月内逐渐下降到没有 临床意义的水平 。 急性感染后 IgM的持续时间在不同 个体中差异较大 。 儿童的 IgM反应一般强于成人 , 约 50%的成人患者无法在 Mp感染后测到 IgM的升高 IgG的出现时间晚于 IgM, 5周左右达到峰值 , 上升 速度较慢且在体内的持续时间较长 ( 4年左右 ) , 但 在感染数月后就会下降到较低水平 。 有些儿童无法 测得明显的 IgG反应 特异性 IgA的免疫反应与 IgM类似 , 但其在成年人尤 其是老年人中的反应水平更高 肺炎支原体的免疫性 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 冷凝集试验 :冷凝集素是对 Mp最早的体液反应 , 50% 的病人在 Mp感染第 2周时的滴度可达到 1:32以上 , 而 6 周内即降至感染前的水平 。 冷凝集试验虽然简便 、 快 速 , 但它不是针对 Mp的特异性试验 , 多种其他微生物 感染 ( 如 EB病毒 、 巨细胞病毒 、 肺炎克雷伯菌 ) 和自 身免疫性疾病时冷凝集素滴度均可升高 。 同时 , 该试 验的敏感性也只有 5060%, 对于 12岁以下的儿童其敏 感性则更差 补体结合试验 (CFT):十几年前 , CFT仍是 Mp血清学 试验的标准方法 , 但越来越多的研究表明该方法的敏 感性和特异性都不够高 。 CFT所用的抗原为 Mp的氯仿 -甲醇糖脂抽提物 , 它可与人类 、 细菌及植物的某些抗 原表位发生交叉反应 ( 如脑膜炎时 , CFT滴度可明显 升高 ) 。 CFT测定的主要是 IgM, 对 IgG不很敏感 , 导 致其整体敏感性偏低 。 肺炎支原体的血清学试验(一) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 间接血凝试验 (PHA): 将提纯的 Mp抗原连接到红细胞 ( 禽类或羊 ) 上 , 与血清中的抗 Mp抗体可发生凝集反 应 。 该试验的敏感性和特异性均明显优于 CFT。 PHA不 能区分抗体的类型 , 因此单份测定出现低滴度的抗体阳 性结果并不能确定是既往感染还是新近感染 。 最好能间 隔 23周再采取第 2份血样进行测定 , 观察抗体滴度是否 有 4倍以上的增加 ( 血清转化 ) 。 单次测定出现高滴度 抗体阳性 ( 大于 1:8) 也有助于对 Mp新近感染的判断 明胶颗粒凝集试验 (PA): 其原理与间接血凝试验基本相 同 , 只是用人工合成的明胶颗粒取代了红细胞作为凝集 试验的载体 , 从而使结果判定更清晰 , 静置稳定性更好 , 非特异性反应大大减少 , 检测的敏感性也有了进一步提 高 ( 对 IgM和 IgA更敏感 ) 肺炎支原体的血清学试验(二) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 酶联免疫吸附试验 ( ELISA) : 是目前 Mp血清学试验 中常用的方法 , 可分开检测 IgM、 IgG和 IgA, 敏感性和 特异性均能达到较高的水平 。 虽然单次测定 IgM ( 或 IgA) 阳性即可基本判定为 Mp的新近感染 , 但阴性时却 无法排除感染的可能性 。 IgG一般须进行间隔 2周以上的 双份血清测定 , 有 4倍以上滴度上升时才能做出 Mp新近 感染的诊断 。 因此 , 在 ELISA测定中应强调同时检测 IgG和 IgM ( 或 IgA) , 且最好能对间隔 2周以上的双份 配对血清进行抗体转化情况的测定 , 从而做出明确的诊 断 金标快速检测: 具有简便 、 快速的优点 。 但也同样应强 调 IgG和 IgM的同时检测 。 由于只能进行定性测定 , 无 法观察血清转化情况 , 限制了其在临床诊断中的价值 其它方法: 间接免疫荧光试验 ( IFA) 、 乳胶凝集试验 ( LA) 、 免疫印迹测定 ( WB) 、 黏附抑制试验 、 放射 免疫沉淀试验 、 补体介导的杀伤试验等 肺炎支原体的血清学试验(三) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 对肺炎支原体的治疗原则 对仅有上呼吸道症状的肺炎支原体感染,不需要进行 抗生素治疗 支原体肺炎虽然有一定的自限性,但仍应进行抗生素 治疗以缩短病程并减少其传染性 在非典型性肺炎的病原体未完全确定时,可以采取一 些经验用药,对 Mp有效的药物也能覆盖一些其他病 原体(非病毒类) 抗生素的使用:首选为大环内酯类,也可选用四环素 类(老年人)和喹诺酮类。 Mp对 -内酰胺类抗生素 天然耐药,磺胺类对 Mp也没有作用 抗生素使用一般应持续 710天,但口服用药延长至 1421天也是合适的 除使用抗生素外,还应采取一些对症治疗措施(止咳 药、退烧药、止痛剂等) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 赛乐迪亚( Serodia) MYCOII 肺炎支原体抗体明胶颗粒凝集试验 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 凝集试验与 ELISA的原理比较(一) ELISA Color 凝集试验 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 凝集试验与 ELISA的原理比较(二) ELISA 凝集试验 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 凝集试验与 ELISA操作步骤的比较 ELISA 凝集试验 加入样品和稀释液 第一步反应 洗涤 洗涤 第二步:酶反应 显色 第三步: 加入底物 结果判读 孵 育 凝集图像 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 反应温度对凝集试验及 ELISA的影响 凝集试验 10 20 30 反应温度( ) 反应 ELISA 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 不同类型样品对 凝集试验及 ELISA 检测结果的影响 X:假阳性 O 加热灭活 X:与底物有关 O 溶血 O 黄疸 O 脂血 O O 血浆 O O 血清 ELISA 凝集试验 样品类型 O:无影响 :部分有影响 X :有影响 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 明胶颗粒的制备 明 胶 阿拉伯胶 醋 酸 染料 /色素 偏 磷 酸 乙 醇 水 3.0m 表面电荷 -0.760 -0.830 明胶颗粒(电镜照片) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 明胶颗粒的致敏 5%明胶颗粒 /0.15M PBS( pH7.2) 5ppm 丹宁酸 /0.15M PBS( pH7.2) 孵育( 37 , 15min) 生理盐水洗涤( 2000rpm, 5min) 活化的明胶颗粒 /0.15M PBS( pH5 9) 抗原 孵育( 37 , 60min) 生理盐水洗涤( 2000rpm, 5min) 5%致敏明胶颗粒 /悬浮液 * 冷冻干燥 * 0.15M PBS(加入正常兔血清、明胶、阿拉伯胶等) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 SERODIA- MYCOII操作步骤 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 SERODIA- MYCOII的结果判读 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 最终稀释倍数 非特异性反应 滴度 40 80 160 320 640 12 80 25 60 51 20 102 40 204 80 对 照 肺炎支原体 ( Mac株) ++ ++ ++ 640 人形支原体 ( PG21株) < 40 唾液支原体 < 40 口腔支原体 < 40 口腔支原体 II型 < 40 发酵支原体 < 40 咽支原体 < 40 SERODIA- MYCOII的特异性 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 正常人肺炎支原体抗体滴度的分布 Myco II测定的抗体滴度达到 1:40 :抗 Mp抗体阳性 Myco II测定的抗体滴度达到 1:160 :提示新近感染 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 以 p180免疫印迹法作为参考方法,用 56份血清样品对 5种 Mp抗体商品化试验进行评估 p180/ 其它方法 血清份数 CFT IFA ELISA PA LA 33 33 33 33 33 21 20 19 22 21 0 0 0 0 0 2 3 4 1 2 总体一致率 96.4% 94.6% 92.8% 98.2% 96.4% 敏感性 100% 100% 100% 100% 100% 特异性 91.3% 87.0% 82.6% 95.6% 91.3% CFT:补体结合试验; IFA:间接免疫荧光试验; ELISA:酶联免疫吸附试验; PA:明胶颗粒凝集试验; LA:乳胶凝集试验 SERODIA- MYCOII与其它方法比较(一) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 p180免疫印迹图象出现显著变化的 6对血清样品的血清检测结果 患者号 (性 别 /年龄 ) 日期 月 /日 p180 印迹 CFT IFA ELISA PA LA O.D.值 比率 1 (男 /3岁 ) 1/08 1/25 0 ++ <8 32 <64 128 0.01 0.27 27 40 1280 2 (男 /4岁 ) 10/16 12/17 0 +++ <8 32 64 512 0.21 0.41 2 <40 5120 ++ 3 (男 /4岁 ) 1/16 2/17 0 +++ 256 0.34 0.87 2.5 320 2560 ++ 4 (男 /19岁 ) 10/16 11/03 0 ++ 1024 0.31 0.31 1 40 20480 5 (男 /12岁 ) 3/19 3/31 + +++ <8 64 <64 1024 0.39 0.94 2.4 40 20480 6 (女 /26岁 ) 1/06 1/19 + +++ <8 64 <64 256 0.27 0.48 1.8 640 1280 ++ CFT:补体结合试验; IFA:间接免疫荧光试验; ELISA:酶联免疫吸附试验; PA:明胶颗粒凝集试验; LA:乳胶凝集试验 SERODIA- MYCOII与其它方法比较(二 ) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 0.00% 10.00% 20.00% 30.00% 40.00% 50.00% 60.00% 1月 3月 5月 7月 9月 11月 某市 2003年就诊患者 Mp抗体检测阳性率月份分布 全年平均阳性率为: 40.1%( 5254/13094) SERODIA- MYCOII临床应用(一) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 诊断标准 大于等于 1:160 小于 1:160 总计 检测阳性数 112 171 283 出院确诊数 101 132 233 诊断符合率 90.18% 77.19% 82.3% 2004年 1-3月某医院病房送检 Mp结果与临床诊断符合率 说明:在 283例 M p阳性病例中,有 50例的出院第一诊 断为非 Mp感染疾病,不排除同时有 MP感染的可能。 SERODIA- MYCOII临床应用(二) 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 SERODIA- MYCOII临床应用结论 SERODIA- MYCOII凝集试验定量检测的是肺炎支原 体特异性抗体含量,包括 IgG和 IgM抗体。 在诊断方面,由于有部分患者、特别是约 50%的成人 患者无法在 Mp感染后测到 IgM的升高; 而 Mp IgG抗 体在感染数月后仍会下降到较低水平。 IgG和 IgM抗 体滴度达到一定高度时,表现出较好的临床诊断价值 。 在具有发热、咳嗽等症状的上感及非典型肺炎患者中 , Mp具有较高的感染率, Mp感染的实验室诊断在临 床具有广泛的应用价值。 SERODIA- MYCOII检测阳性结果对临床 Mp感染的 诊断与治疗具有令人满意的指导意义。 而应介绍房内空调开关及棉被加枕的位置;冰箱位置及小酒吧使用方法;电视机开关位置及收费电视使用方法;互联网插口处;卫生间冷热水开关及热水供应时间等。 谢 谢!
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